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細(xì)胞培養(yǎng)瓶培養(yǎng)時細(xì)胞污染了怎么補救
發(fā)表日期:2022-08-04

我們立即棄去細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,以PBS潤洗2~3次,加入胰酶處理至細(xì)胞形態(tài)略有改變但未脫離容器時棄去胰酶,加入PBS輕輕潤洗1遍; 

在細(xì)胞培養(yǎng)瓶中加入20×雙抗,浸泡細(xì)胞3~5min,棄去雙抗,并加入新鮮的完全培養(yǎng)基(含10×雙抗)培養(yǎng)12h;

12h棄去培養(yǎng)基以PBS潤洗2~3遍后加入完全培養(yǎng)基(含10×雙抗),傳代時以較小轉(zhuǎn)速離心(如平時以1000r/min離心,則可降為800~900r/min離心),仍以含10×雙抗的培養(yǎng)基培養(yǎng)。

細(xì)胞培養(yǎng)瓶培養(yǎng)時細(xì)胞污染了怎么補救_富道細(xì)胞

若第二代后鏡下找不到細(xì)菌,則第三代起可正常培養(yǎng)。正常培養(yǎng)48h后無反彈則可認(rèn)為污染已清除。

若為霉菌污染,在以PBS潤洗2~3遍后換液,無需加入高濃度雙抗。培養(yǎng)48h后污染未再次出現(xiàn)即可。

若為真菌污染,在PBS潤洗、換液后可加入兩性霉素B(兩性霉素B有細(xì)胞毒性,不推薦使用),也可加入300μg/mL氟康唑培養(yǎng),污染控制后改用150μg/mL培養(yǎng)2~3代。

若懷疑支原體污染,則可進行PCR檢測或直接使用支原體清除試劑(如:某恒生物)。也可購買環(huán)丙沙星注射液,于超凈臺內(nèi)打開直接添加到培養(yǎng)基中,以20μg/mL濃度2代后改用10μg/mL濃度持續(xù)培養(yǎng)約2周。

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