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我們?cè)诎l(fā)現(xiàn)細(xì)胞培養(yǎng)瓶中出現(xiàn)了污染的原因排查一般都是采用單一變量法，先把每種試劑：基礎(chǔ)培養(yǎng)基、FBS、PBS、完全培養(yǎng)基、不加雙抗的完全培養(yǎng)基和凍存液吸取少量到6孔板，放在培養(yǎng)箱過(guò)夜/2天（因?yàn)?℃冰箱溫度低不利于細(xì)菌的生長(zhǎng)，拿來(lái)涂片不易找得到。如果肉眼和顯微鏡看不到細(xì)菌污染也不能排除污染，因?yàn)榧?xì)菌會(huì)依附在細(xì)胞上，空培沒有細(xì)胞，細(xì)菌又很小很難看到，所以最長(zhǎng)可放置7天，若7天后還沒有污染跡象就可以排除?。?。

之后進(jìn)行離心：12000rpm、1min，棄去上清留下少許液體重懸沉淀后涂片、風(fēng)干后滴加結(jié)晶紫染液1min后用少量慢速清水在上面沖洗3次（不要對(duì)著涂片的位置沖?。?，在吸水紙3個(gè)不同位置各壓干一次后滴一滴香柏油到載玻片后在油鏡下觀察有無(wú)細(xì)菌。鏡下形態(tài)規(guī)則、兩頭染色深中間染色淺的長(zhǎng)桿狀是桿菌；形態(tài)是正圓光滑的球狀、整個(gè)球形染色深的是球菌（大小都不是很大的），其它形態(tài)不規(guī)則、過(guò)大/過(guò)小、一大片的可能只是雜質(zhì)和細(xì)胞膜碎片等等。此方法即為革蘭氏染色法，是最常用的細(xì)菌染色法，結(jié)晶紫也可稱之為龍膽紫，是堿性染料。當(dāng)它溶解后，可以被活細(xì)胞攝入，同時(shí)可以使DNA、蛋白質(zhì)、脂肪著色。染色顯示細(xì)胞核（與核酸結(jié)合）呈藍(lán)色，細(xì)胞質(zhì)呈粉紅色。肉眼顯示整個(gè)細(xì)胞呈深藍(lán)色。