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細胞搖瓶在慢病毒轉(zhuǎn)染中的應(yīng)用
發(fā)表日期:2022-10-13

細胞搖瓶作為一種經(jīng)濟、實惠的細胞培養(yǎng)工具,在生物制藥、疫苗制備、細胞與基因治療等領(lǐng)域具有廣泛的應(yīng)用,其中在慢病毒轉(zhuǎn)染中,也會用到這種容器。

慢病毒載體是以HIV-1為基礎(chǔ)發(fā)展起來的基因治療載體。區(qū)別一般的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體,它對分裂細胞和非分裂細胞均具有感染能力,被廣泛地應(yīng)用于表達RNAi的研究中。細胞搖瓶主要用于慢病毒轉(zhuǎn)染懸浮細胞的實驗中,其步驟如下:

1.在2×105/ml懸浮細胞中加入polybrene至6 μg/ml和適量病毒,充分混勻。37℃孵育?;蛘?50g室溫離心4小時(選作,部分難轉(zhuǎn)染的細胞系采用此步驟可以提高轉(zhuǎn)染效率)。 

細胞搖瓶在慢病毒轉(zhuǎn)染中的應(yīng)用_富道細胞

2.(對polybrene毒性敏感的細胞選作此步驟)4小時后(或離心結(jié)束后)加入等體積新鮮培養(yǎng)基以稀釋polybrene。 

3.繼續(xù)培養(yǎng)3-4天。中間視細胞生長情況可傳代或換液。

在使用細胞搖瓶進行慢病毒轉(zhuǎn)染時一定要注意感染時的培養(yǎng)基盡量少些;每1ml的培養(yǎng)基中加入5-10ul的Polybrene(儲存液濃度為2mg/ml ),可以提高效率約3-5倍。不過病毒感染效率的問題都是相對的,達到自己的研究目的即可。

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