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我們是使用細(xì)胞工廠這種大規(guī)模細(xì)胞培養(yǎng)耗材時(shí)是進(jìn)行的貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，那么如果出現(xiàn)貼壁細(xì)胞不貼壁了我們?cè)撛趺醋瞿?？今天富道?xì)胞來跟大家分享一下細(xì)胞工廠培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)不貼壁的六種解決方案：

1、細(xì)胞的傳代最重要的是胰酶處理時(shí)間：消化不夠細(xì)胞本身就是成團(tuán)的；若胰酶處理太久，容易造成細(xì)胞膜蛋白損傷，使細(xì)胞貼壁不緊，顯微鏡下觀察立體感不強(qiáng)，嚴(yán)重的時(shí)候甚至?xí)斐杉?xì)胞死亡。

解決辦法：縮短胰蛋白酶消化時(shí)間或降低胰蛋白酶濃度。

2、缺少貼壁因子：血清中含有促貼壁因子，而無血清培養(yǎng)基工藝中由于缺少這種促貼壁因子，細(xì)胞的貼壁效果會(huì)下降很多。

解決辦法：更換血清。

3、支原體或細(xì)菌的污染。

解決辦法：分離細(xì)胞工廠中培養(yǎng)物，檢測(cè)支原體。清潔支架或培養(yǎng)箱。如發(fā)現(xiàn)支原體污染，丟棄培養(yǎng)物。

4、培養(yǎng)液配置、儲(chǔ)存不當(dāng)，如 pH 值過堿，Gln 量太少等原因。

解決辦法：使用無菌醋酸溶液調(diào)整 pH 值或充入無菌 CO2。

5、復(fù)蘇的細(xì)胞本身狀態(tài)不好，已經(jīng)老化，失去貼附性。

解決辦法：?jiǎn)⒂眯碌谋７N細(xì)胞。

6、如果細(xì)胞比較珍貴或沒有備份細(xì)胞

解決辦法：可嘗試將不貼壁細(xì)胞收集離心，再用 PBS 將沉淀清洗一遍，離心后的沉淀加入胰酶重新消化接種，同時(shí)提高血清濃度到 15%~20%。
  以上就是富道細(xì)胞為大家分享的細(xì)胞工廠培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)不貼壁的六種解決方案。希望能對(duì)各位有所幫助