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大腸菌群是指一群能發(fā)酵乳糖、產(chǎn)酸產(chǎn)氣、需氧和兼性厭氧的革蘭陰性無芽胞桿菌，在實際應用中常用它作為食品是否受到糞便污染的指標。在所有的檢測方法中，利用細胞培養(yǎng)瓶進行檢測是比較常用的一種。操作步驟如下：

細胞培養(yǎng)瓶作為細胞培養(yǎng)常用的耗材之一，對于細胞的生長繁殖起著至關(guān)重要的作用。目前市面上的細胞培養(yǎng)瓶主要以玻璃或塑料材質(zhì)為主，這類耗材不同于普通的醫(yī)藥塑料瓶，價格相對比較高，那么這種瓶子可以重復使用嗎？

細胞轉(zhuǎn)瓶是一種可同時滿足試驗和產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)中對細胞和組織的大規(guī)模生產(chǎn)要求的高質(zhì)量耗材，廣泛適用于動植物細胞、細菌、病毒的培養(yǎng)。在細胞培養(yǎng)時經(jīng)常會遇到污染細胞的情況，常見的幾種污染如下：

細胞培養(yǎng)瓶是一種方形、寬瓶頸的細胞培養(yǎng)容器，是貼壁細胞培養(yǎng)常用的耗材。細胞的生長受到多種因素的影響，其中常見的主要是以下四個方面：

細胞搖瓶是懸浮細胞培養(yǎng)時經(jīng)常會用到的一種細胞耗材，不同于貼壁細胞，懸浮細胞懸浮在培養(yǎng)液中生長。除了氣體環(huán)境、PH、滲透壓等條件外，搖床轉(zhuǎn)速也會影響到細胞的生長。細胞培養(yǎng)需要適宜的生長環(huán)境和生長溫度，這需要選擇合適的搖床進行輔助。恒溫搖床是與細胞搖瓶搭配使用的一種專用設備，培養(yǎng)細胞時搖床需要不停的轉(zhuǎn)動，來為細胞提供氣體條件，同時也可以避免細胞沉積而帶來的細胞死亡。

在懸浮細胞培養(yǎng)中，細胞搖瓶是常用的一種細胞培養(yǎng)耗材。懸浮細胞的生長不依賴支持物表面，在培養(yǎng)液中呈懸浮狀態(tài)生長。在實際培養(yǎng)中，我們?nèi)绾未_定加液量的多少呢？細胞搖瓶常見的規(guī)格包括125ml、250ml、500ml、1000ml，滿足不同規(guī)模的細胞培養(yǎng)需求，如125ml與250ml小容量的瓶子主要應用于小規(guī)模的試驗，而500ml和1000ml規(guī)格則用于中的規(guī)模的細胞培養(yǎng)試驗。這種耗材使用時要借助搖床的震動來降低細胞的抱團率，維持細胞良好的生長狀態(tài)。

細菌、真菌污染細菌和真菌污染很容易被檢測, 因為受到細菌、真菌污染的細胞, 培養(yǎng)過程中細胞培養(yǎng)瓶的培養(yǎng)基會出現(xiàn)肉眼可見的明顯特征。細菌污染會導致培養(yǎng)基出現(xiàn)渾濁、顏色改變以及pH值急劇變化, 受污染的貼壁細胞在幾天內(nèi)會逐漸脫壁死亡。真菌污染后的細胞生長速度變慢, 培養(yǎng)基中會漂浮白色

今天富道細胞來跟大家分享一下常見細胞中的HepG2細胞用細胞培養(yǎng)瓶進行培養(yǎng)的情況。該細胞來源于一名15歲的白人少年的肝癌組織。模式染色體數(shù)為55，在免疫抑制小鼠中不致瘤。目前尚未證明該細胞中有HBV基因組。它的培養(yǎng)環(huán)境分為：ATCC：90% MEM+10% FBS

今天富道細胞來跟大家分享一下細胞工廠中的黑膠蟲污染：目前關(guān)于它的本質(zhì)還說法不一，要在高倍鏡下才能看到，培養(yǎng)基內(nèi)有能動的小黑點、高倍鏡下可見黑色小蟲游走、會穿梭的黑色點狀顆粒。黑膠蟲污染后會出現(xiàn)細胞狀態(tài)差、低倍下呈黑色點狀、高倍下做布朗運動、培養(yǎng)基不渾濁、與細胞數(shù)量成反比。

我們在使用細胞培養(yǎng)瓶進行培養(yǎng)細胞時總會遇到一些特殊情況而養(yǎng)不好細胞，今天富道細胞就來跟大家分享一下細胞培養(yǎng)瓶中細胞生長緩慢應該怎么辦。接種量太少。細胞長得太滿會有接觸抑制，而細胞接種濃度低，也會使細胞生長繁殖較慢。一般情況下，細胞長至80-90%可進行傳代，當細胞長得不太滿時進行了傳代，會使得細胞接種濃度太低，可能導致細胞自分泌的物質(zhì)濃度減少，造成生細胞生長緩慢。

我們在使用細胞培養(yǎng)瓶進行細胞培養(yǎng)時最怕出現(xiàn)的情況可能就是細胞培養(yǎng)瓶的發(fā)現(xiàn)了污染了，今天富道細胞來跟大家分析一下細胞培養(yǎng)瓶培養(yǎng)細胞時的污染情況細胞房要保證干燥整潔，不然很容易染菌。真菌污染后，培養(yǎng)液清亮，培養(yǎng)瓶中出現(xiàn)絲狀物，細胞生長變慢，最后由于營養(yǎng)耗盡及毒性作用而使細胞脫落死亡。一旦發(fā)現(xiàn)真菌污染，可能導致整個培養(yǎng)箱中的細胞受到污染。需要徹底清理打掃培養(yǎng)箱、超凈臺、水浴鍋、細胞房等。

我們在發(fā)現(xiàn)細胞培養(yǎng)瓶中出現(xiàn)了污染的原因排查一般都是采用單一變量法，先把每種試劑：基礎(chǔ)培養(yǎng)基、FBS、PBS、完全培養(yǎng)基、不加雙抗的完全培養(yǎng)基和凍存液吸取少量到6孔板，放在培養(yǎng)箱過夜/2天（因為4℃冰箱溫度低不利于細菌的生長，拿來涂片不易找得到。如果肉眼和顯微鏡看不到細菌污染也不能排除污染，因為細菌會依附在細胞上，空培沒有細胞，細菌又很小很難看到，所以最長可放置7天，若7天后還沒有污染跡象就可以排除！）。

我們在使用細胞工廠等細胞培養(yǎng)耗材進行細胞培養(yǎng)時，如果出現(xiàn)細胞污染的情況下，我們這段時間的努力可能都會白費。那我們?nèi)绾畏直孢@些污染的情況呢？今天富道細胞就跟大家分享一下。

我們之前介紹了細胞工廠培養(yǎng)細胞時常見的污染，今天富道細胞就來跟大家說一下細胞工廠預防細胞污染及補救方法。我們應對細胞工廠內(nèi)出現(xiàn)污染最好對策是預防，這一點是毋庸置疑的。所以我們在培養(yǎng)時細胞要勤快，平時所用到的一次性耗材不可重復使用，使用輔助的器皿等要及時高壓滅菌，滅菌后超過一周未使用也應重新滅菌。

我們在使用細胞工廠等細胞培養(yǎng)耗材培養(yǎng)細胞時都有可能會發(fā)現(xiàn)細胞污染富道細胞總結(jié)了一些常見細胞工廠的分類它們分別為：細菌污染、真菌污染、霉菌污染，支原體污染。細菌污染一般是芽孢桿菌、葡萄球菌造成的，污染的主要特征為細胞工廠等細胞培養(yǎng)耗材中培養(yǎng)基變黃、渾濁，低倍鏡下呈沙粒狀布滿細胞間隙或培養(yǎng)基，高倍鏡下可見桿狀或球狀的細菌在培養(yǎng)基中游動（與細胞碎片的布朗運動明顯不同）。需注意的是，在污染初期，細菌常成群存在，不一定會有明顯的運動，此時需引起警惕。

我們立即棄去細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，以PBS潤洗2~3次，加入胰酶處理至細胞形態(tài)略有改變但未脫離容器時棄去胰酶，加入PBS輕輕潤洗1遍； 在細胞培養(yǎng)瓶中加入20×雙抗，浸泡細胞3~5min，棄去雙抗，并加入新鮮的完全培養(yǎng)基（含10×雙抗）培養(yǎng)12h；12h棄去培養(yǎng)基以PBS潤洗2~3遍后加入完全培養(yǎng)基（含10×雙抗），傳代時以較小轉(zhuǎn)速離心（如平時以1000r/min離心，則可降為800~900r/min離心），仍以含10×雙抗的培養(yǎng)基培養(yǎng)。